郑佩佩1946年1月6日生于中国上海,1961年离开上海到香港。1963年考入南国实验剧团,为第二期毕业生,毕业后加入邵氏电影公司。
1963年,在首部电影《宝莲灯》中反串男角,饰演刘彦昌,被胡金铨看上。1964年,主演文艺片《情人石》,获得国际独立制片人协会“金武士奖”,是第一个得到此奖的亚洲女演员。
1966年,主演胡金铨导演的中国新派武侠电影的开山之作《大醉侠》。
1968年,主演《金燕子》饰演英姿飒爽的“金燕子”;主演电影《玉罗刹》饰演“玉罗刹”冷秋寒,1969年被报界选为“武侠影后”。
1971年,参演电影《钟馗娘子》;同年,宣告退出影坛。
1992年复出;1993年,参演周星驰、巩俐古装喜剧电影《唐伯虎点秋香》,饰演口齿伶俐、神经兮兮的“华夫人”。
1994年3月,参演杨紫琼、甄子丹主演的电影《咏春》,饰演严咏春的师父。1996年,参演陈勋奇、周海媚主演的民国电视剧《上海探戈》,在剧中饰演陈勋奇的母亲。
1999年,出演张卫健、恬妞主演电视剧《少年英雄方世玉》,饰演“五梅”。
2001年,出演李安导演的电影《藏龙">卧虎藏龙》,饰演武功阴毒诡异“碧眼狐狸”,获得香港电影金像奖最佳女配角奖,并角逐奥斯卡金像奖。
2004年,参演胡歌、刘亦菲主演的古装剧《仙剑奇侠传》,饰演“姥姥”;与李若彤、宁静等主演的电视剧《杨门女将》播出,郑佩佩在剧中出演佘太君一角。
2005年,在古装喜剧电视剧《李卫辞官》里饰演李卫母亲。
2010年,参演张柏芝主演古装战争电影《杨门女将之军令如山">杨门女将之军令如山》,再次饰演佘太君。
2013年7月,在黄晓明主演的电视剧《精忠岳飞》里饰演“岳母”。
2014年,郑佩佩与本-维肖主演讲述了中国母亲在儿子死后与儿子男友故事的英国电影《轻轻摇晃》,该片获得圣丹斯电影节“世界电影评委会剧情片摄影奖”。
2014年4月,参加由湖南卫视原创碧生源冠名的明星姐弟自助远行真人秀节目《花儿与少年》,担任嘉宾角色“大姐”。
2015年,与斯琴高娃、陈伟霆、赵柯主演的动作电影《搏击迷城》。
2016年,参演胡军主演的偶像都市话题剧《小情人》,70岁的郑佩佩以一头红发造型出演“最潮奶奶”,并在剧里跳广场舞。同年,参演蒋欣、陆毅主演的都市情感剧《盲约》,饰演“夏天的奶奶”。