1996年处女作《我枪杀了安迪·沃霍尔》之后,塞洛克斯一边活跃在喜剧舞台上,另出演了《阿珠与阿花》、《巴克斯特》和《伤心人俱乐部》等喜剧影片,2000年《美国精神病人》中为初露锋芒的克里斯蒂安·贝尔配戏,2002年的《霹雳娇娃2》则是塞洛克斯的第一部卖座商业大片。此外他还出演过两部热门电视剧的电影版,分别是《有糖果的陌生人》和《迈阿密风云》,大卫·林奇执导的《内陆帝国》、《穆赫兰道》中也能看到他的身影。电视剧方面,早期塞洛克斯出演过警察剧《特区刑警》,后在《双面女间谍》、《欲望都市》以及《六尺风云》等中客串登场。
2006年贾斯汀·塞洛克斯执导了处女作《奉献》,07年通过圣丹斯电影节公开,本届电影节上还有他的两部出演作品《蹩脚英语》和《十》,后者中他出演的不是别人,而是基督耶稣。塞洛克斯出演的最新电影是本·斯蒂勒自导自演的喜剧片《热带惊雷》,他是也本剧的两位编剧之一。
2019年,贾斯汀·塞洛克斯为迪士尼真人版动画电影《小姐与流浪汉》中的“流浪汉”配音。
2011年,贾斯汀·塞洛克斯和詹妮弗·安妮斯顿结识于《漫游》片场,并开始交往。2012年8月10日,贾斯汀·塞洛克斯生日,两人宣布订婚。2015年8月5日,贾斯汀·塞洛克斯44岁生日派对上,两人秘密完婚。
2018年2月16日,贾斯汀·塞洛克斯与詹妮弗·安妮斯顿宣布离婚。